定量pcr引物设计网站
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简述信息一览：
定量PCR可以扩增长片段吗
1、荧光定量PCR不仅能够精确定量PCR产物，还可以实时监测整个扩增过程，包括扩增效率、溶解温度等，而普通PCR无法实现这些功能。普通PCR需要通过电泳来检测产物分子量大小，而荧光定量PCR则可以直接定量分析，无需电泳。
2、在反应要求上，荧光定量PCR对扩增片段长度有较高要求，一般在100-300bp之间，而普通PCR可以扩增长片段的DNA，无需限制片段大小。此外，荧光定量PCR在产物分析时，可以省略电泳步骤，直接进行定量分析，而普通PCR产物分析通常需要通过凝胶电泳来分离和分析PCR产物。
3、反应要求：荧光定量对扩增片段有较高的要求，一般为100-300bp；普通定量可以扩增长点的片段。如果不需要检测产物分子量大小，荧光定量可以不进行电泳就对产物进行定量分析，普通pcr必须电泳。结果：荧光定量可以实现精确定量，普通pcr则不行。
在线设计引物网站有哪些-如何快速设计shRNA
1、之前NCBI上有一个probe选项可以直接设计引物，上面会给出上下游序列。
2、shRNA引物设计包括数据库介绍、输入基因ID、选择推荐的靶点序列、添加酶切位点和Loop环结构，以及设计shRNA片段。将Oligo片段正反向混合退火后，即可与载体连接，构建shRNA干扰载体。
3、基因研究中，敲除基因，研究该基因的功能是最常用的套路。一般 ShRNA 可通过 RNA 干扰来抑制基因的表达， 是基因研究中必不可少的环节。下面就主要围绕设计 ShRNA 引物序列，手把手教你构建 ShRNA 质粒，轻松敲基因。
4、有趣的是，除了短双链RNA，短发夹RNA（short hairpin RNA，shRNA），比如茎环结构在细胞内经过加工后也可以变成siRNA，从而产生RNA干扰（7）。这使得构建表达干扰RNA的载体，从而使哺乳动物细胞内基因表达长期沉默成为可能（8）。
5、Life Technologies公司有个非常实用的在线shRNA设计软件，操作非常方便，而且设计出来的shRNA不再需要到NCBI上Blast，直接可以用的。
6、LifeTechnologies公司有个非常实用的在线shRNA设计软件，操作非常方便，而且设计出来的shRNA不再需要到NCBI上Blast，直接可以用的。
那些好用的在线引物设计工具
PrimerBLAST 功能特点：在线工具，结合BLAST算法进行引物特异性搜索，特别适用于荧光PCR引物设计。 优势：强大且免费的在线工具，能够快速验证引物的特异性和潜在的非特异性结合位点。 primer3 功能特点：在线工具，适用于设计普通PCR引物，提供多种参数设置以满足不同需求。
Primer3Plus是一个开源的在线引物设计工具，操作简便。只需上传基因序列文件，保持默认参数设置后，通过点击Pick Primers按钮，即可生成设计好的引物。PrimerBank是哈佛大学维护的一个公共资源，专为PCR引物设计提供。它包含了大量经过验证的引物，适用于人类和小鼠基因的表达量检测或定量qPCR。
此外，推荐3个在线引物设计工具：Primer-Blast、Primer3 Plus、PrimerBank，分别集成经典引物设计软件PrimerBlast功能，方便快捷。最后，整理了一份引物设计原则与考虑因素表格，有助于引物设计过程。
Primer-BLAST是一个用于设计聚合酶链反应（PCR）特异性寡核苷酸引物的在线工具。用户可以直接从Blast主页（blast.ncbi.nlm.nih.gov/）或通过以下链接进入：ncbi.nlm.nih.gov/tools/...。该工具结合了 Primer3 软件和 NCBI 的 Blast 功能，用于引物特异性的验证。
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